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LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

• 细菌、细胞或组织样品的制备：
  
  • 细菌或培养细胞：
    
    • 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；
      
    • 按照细菌或细胞数量(10⁴个)∶提取液体积(mL)＝1000～5000∶1的比例（建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；
      
    • 8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  • 组织样本：
    
    • 按照组织质量(g)∶提取液体积(mL)＝1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
      
    • 8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
• 血清（浆）样品：直接检测。

• 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
  
• 在EP管中加入下列试剂
  

  成分(μL)	测定管	对照管
  样本	10	10
  试剂一	50	50
  试剂二	10
  蒸馏水		10

• 充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴15min。
  
• 向各反应管中加入50μL试剂三。
  
• 充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴15min。
  
• 向各反应管中加入150μL试剂四。
  
• 充分混匀，室温静置15min。
  
• 450nm下测定吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照管。

• 用微量石英比色皿测定
  
  • 标准条件下测定的回归曲线，y＝0.9108x+0.0037 (x为标准品浓度，umol/mL；y为ΔA)。
    
  • 血清(浆)LDH活力的计算
    单位的定义：每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
    LDH(nmol/min/mL)＝(ΔA－0.0037)÷0.9108÷T×10³＝73.2×ΔA
    
  • 细胞、细菌和组织中LDH活力的计算
    
    • 按样本蛋白浓度计算：
      单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
      LDH(nmol/min/mg prot)＝[(ΔA－0.0037)÷0.9108×V₁]÷(V₁×Cpr)÷T×10³＝73.2×ΔA÷Cpr
      需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
      
    • 按样本鲜重计算：
      单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
      LDH(nmol/min/g鲜重)＝[(ΔA－0.0037)÷0.9108×V₁]÷(W×V₁÷V₂)÷T×10³＝73.2×ΔA÷W
      
    • 按细菌或细胞密度计算：
      单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
      LDH(nmol/min/10⁴ cell)＝[(ΔA－0.0037)÷0.9108×V₁]÷(2000×V₁÷V₂)÷T×10³＝0.037×ΔA
    • V₁：加入反应体系中样本体积，0.01mL；
      
    • V₂：加入提取液体积，1mL；
      
    • T：反应时间，15min；
      
    • Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；
      
    • W：样本质量，g；
      
    • 2000：细胞或细菌总数，2000万；
      
    • 10³：1μmol/mL＝10³nmol/mL。
• 使用96孔板测定
  
  • 标准条件下测定的回归曲线，y＝0.4554x+0.0037 (x为标准品浓度，umol/mL；y为ΔA)。
    
  • 血清(浆)LDH活力的计算
    单位的定义：每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
    LDH(nmol/min/mL)＝(ΔA－0.0037)÷0.4554÷T×10³＝146.4×(ΔA－0.0037)
    
  • 细胞、细菌和组织中LDH活力的计算
    
    • 按样本蛋白浓度计算：
      单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
      LDH(nmol/min/mg prot)＝[(ΔA－0.0037)÷0.4554×V₁]÷(V₁×Cpr)÷T×10³＝146.4×(ΔA－0.0037)÷Cpr
      需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
      
    • 按样本鲜重计算：
      单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
      LDH(nmol/min/g鲜重)＝[(ΔA－0.0037)÷0.4554×V₁]÷(W×V₁÷V₂)÷T×10³＝146.4×(ΔA－0.0037)÷W
      
    • 按细菌或细胞密度计算：
      单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
      LDH(nmol/min/10⁴ cell)＝[(ΔA－0.0037)÷0.4554×V₁]÷(2000×V₁÷V₂)÷T×10³＝0.073×(ΔA－0.0037)
    • V₁：加入反应体系中样本体积，0.01mL；
      
    • V₂：加入提取液体积，1mL；
      
    • T：反应时间，15min；
      
    • Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；
      
    • W：样本质量，g；2000：细胞或细菌总数，2000万；
      
    • 10³：1μmol/mL＝10³nmol/mL。

• 标准曲线线性范围为：0.1～2μmol/mL。
  
• ΔA线性范围为：0.01～1。